西尼羅河病毒熒光玻片法檢測(cè)試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

檢查

1.實(shí)驗(yàn)室檢查

白細(xì)胞數(shù)減少，腦炎型者腦脊液中淋巴細(xì)胞增多，蛋白增高。

2.免疫學(xué)檢查

利用血清學(xué)抗體檢測(cè)方法，常用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）法，采用患者急性期和恢復(fù)期雙份血清，兩份血清同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，以恢復(fù)期血清較急性期特異性IgG抗體滴度升高4倍以上為陽(yáng)性，有助于本病的診斷。

3.病原學(xué)檢查

自潛伏末期至發(fā)病后第5天，從患者血液或腦脊液中分離出病毒，陽(yáng)性率較高，對(duì)新分離病毒的鑒定一般采用已知血清進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)。

4.分子生物學(xué)檢查

RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)）法檢測(cè)，通過(guò)設(shè)計(jì)西尼羅河熱病毒特異引物對(duì)血清或腦脊液標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR試驗(yàn)，陽(yáng)性率高，具有特異性診斷價(jià)值。

用途

西尼羅(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼羅重組抗原檢測(cè)人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實(shí)驗(yàn)僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。

概述

 感染了西尼羅病毒會(huì)導(dǎo)致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個(gè)國(guó)家檢測(cè)出該病毒。本試驗(yàn)經(jīng)CDC提供的試劑檢驗(yàn)與驗(yàn)證。本試驗(yàn)使用了一種稱為WNRA的重組抗原，它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學(xué)指標(biāo)，WNRA蛋白是一種重組抗原，它是由含有西尼羅病毒兩個(gè)抗原的序列多肽構(gòu)成。

實(shí)驗(yàn)的原理

檢測(cè)西尼羅病毒IgG ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。

提供的材料

• 微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被結(jié)合西尼羅重組抗原的單抗。2－8℃下保存至保質(zhì)期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

• IgG樣品稀釋液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
• IgG陰性質(zhì)控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲(chǔ)存。
• IgG陽(yáng)性質(zhì)控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲(chǔ)存。
• 洗滌液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。
• EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
• 酶聯(lián)物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
• TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。
• 終止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。

西尼羅河病毒熒光玻片法檢測(cè)試劑盒

操作步驟：

• 標(biāo)記將要使用的板條，注意微孔板已經(jīng)按照統(tǒng)一排列，如下所述包被西尼羅抗原和質(zhì)控抗原。

• 將血清樣品﹑陰性質(zhì)控和陽(yáng)性質(zhì)控同樣地用樣每孔加入50ul稀釋后的樣品，以下為一個(gè)血清樣品使用一個(gè)板條的*。
• 品稀釋液按1：300稀釋。

• 封板，在濕潤(rùn)的溫育器里37℃下溫育1小時(shí)。
• 溫育后，用自動(dòng)洗板機(jī)，使用洗滌液洗板6次。
• 在每孔中加入50ul的酶聯(lián)物。
• 封板，在濕潤(rùn)的溫育器里37℃下溫育1小時(shí)。
• 溫育后，用自動(dòng)洗板機(jī)，使用洗滌液洗板6次。
• 每孔加入150ul的EnWash，在室溫下溫育5分鐘
• 溫育后，用自動(dòng)洗板機(jī)，使用洗滌液洗板6次。
• 每孔加入75ul的TMB底物液。
• 封板，在室溫下，避光處溫育10分鐘。
• 每孔加入50ul的終止液終止反應(yīng)。
• 在450nm處讀取吸光率。

結(jié)果的計(jì)算

結(jié)果的變化將會(huì)非常大，以下結(jié)果僅供指引。

計(jì)算ISR值：

計(jì)算在同一實(shí)驗(yàn)里WNR抗原的兩個(gè)陰性質(zhì)控的平均值，計(jì)算同一實(shí)驗(yàn)里NC抗原的兩個(gè)陰性質(zhì)控的平均值，用WNRA/NCA，得出陰性質(zhì)控的ISR值。同樣地計(jì)算陽(yáng)性質(zhì)控和樣品得ISR值，陽(yáng)性質(zhì)控的ISR值應(yīng)高于3.0，陰性質(zhì)控的ISR值應(yīng)低于1.5。

結(jié)果的判斷：

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若于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，呈均勻混濁，后期  可因產(chǎn)生自溶而變得澄清。甲型溶血性鏈球菌不產(chǎn)生自溶  酶，故加入膽鹽等表面活性劑不能溶解，利用此特點(diǎn)可鑒  別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌。肺炎鏈球菌在血瓊脂  平板上菌落周圍形成α溶血環(huán)。細(xì)菌生長(zhǎng)的能量來(lái)源于分  解葡萄糖，伴隨乳酸的形成。乳酸的堆積會(huì)抑制細(xì)菌的生  長(zhǎng)，故間斷性加入堿可使肺炎鏈球菌大量繁殖。Optochin  可抑制肺炎鏈球菌生長(zhǎng)。該菌可分解多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)  氣。膽汁溶解試驗(yàn)陽(yáng)性、Optochin敏感試驗(yàn)陽(yáng)性。大多數(shù)  新分離出的肺炎鏈球菌可發(fā)酵菊糖，故菊糖發(fā)酵試驗(yàn)在鑒  別肺炎球菌與甲型溶血性鏈球菌時(shí)有一定的參考價(jià)值。抗  原構(gòu)造編輯莢膜多糖抗原存在于肺炎鏈球菌莢膜中。根據(jù)  莢膜多糖抗原性的不同將肺炎球菌分為91個(gè)血清型。菌體  抗原⑴C多糖：存在于肺炎鏈球菌細(xì)胞壁中，具有種特異性  ，為各型菌株所共有。C多糖可被血清中C-反應(yīng)蛋白沉淀。  在鈣離子存在時(shí)，C多糖可與正常人血清中稱為C-反應(yīng)蛋白  （C reactive protein,CRP）的β球蛋白結(jié)合，發(fā)生沉淀  。⑵M蛋白：具有型特異性。